涵盖从药效评价分析到分子作用机制研究的各个步骤

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脑心通（NXT）作为一种中药制剂，由黄芪、丹参、赤芍、当归、桂枝等16种药材组成，具有益气活血、化瘀通络等得作用，临床上已广泛应用于冠心病等心脏疾病的治疗。最近的研究表明，NXT通过影响炎症、凋亡、氧化应激、新生血管形成、胰岛素敏感性和脂/糖代谢，以及恢复缺血损伤，发挥了心脏保护作用。

为了研究NXT对心肌病的心肌保护作用，我们利用特非那定（TFD）构建了斑马鱼心肌病模型，对NXT的药效进行评价。结果显示斑马鱼心肌病模型的心包水肿、静脉充血、血流明显减少、心包面积增大、心率减慢、SV-BA距离异常增加等表型在NXT治疗后得到了显著恢复。因此，NXT可以显著恢复斑马鱼TFD诱导的心肌病的表型。

NXT 治疗恢复了斑马鱼胚胎中 TFD 诱导的心肌病。A 4 dpf 时斑马鱼幼鱼的侧视图。TFD 处理组出现心包水肿（红色虚线）和血流减慢（红色箭头）。B 基于红细胞像素密度变化的斑马鱼幼鱼的血流运动比率。C NXT 的最佳回收浓度。D 四组斑马鱼幼虫的心包面积（n=15 个胚胎/组）。E 斑马鱼幼鱼的心率（n=15 胚胎/组）。F 四组斑马鱼幼鱼的 SV-BA 距离。G 96hpf 幼鱼的心脏形态。注意 TFD 治疗组的心室扩大（V 心室；A 心房）。

为了确定NXT在治疗心肌病中的分子靶点，从Tg（cmlc2：eGFP）中分离了斑马鱼胚胎心脏，包括对照组、TFD、TFD+NXT和NXT处理组，进行了RNA-Seq分析，然后对筛选基因的表达模式进行聚类分析。

NXT治疗心肌病斑马鱼心脏差异表达基因的转录组分析。A 96 hpf时分离心脏转基因荧光鱼的心脏组织进行转录组分析。B 维恩图和C 热图分析显示对照、TFD、TFD+NXT和NXT组中的差异基因。

基于斑马鱼心脏的RNA-Seq数据，总结出斑马鱼中30个与人类同源的DCM相关基因，通过热图聚类分析探索和qRT-PCR验证心肌相关基因和心血管发育相关基因，从结果发现heg1可能是NXT潜在的分子作用靶点。

NXT靶向节点筛选和下游通路验证。通过热图聚类分析探索心肌相关基因 A和心血管发育相关基因 B，并通过qRT-PCR (C,D)进行验证。

为了进一步研究heg1信号，利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统构建了heg1△25突变体斑马鱼。heg1△25突变体存在心血管畸形包括心包面积、血流量、心率和SV-BA距离等指标指标异常，在NXT治疗下可以恢复，表明HEG1信号传导可能是NXT治疗心肌病的重要分子靶点之一。

NXT修复了heg1△25突变体的心血管畸形。A 96 hpf斑马鱼胚胎的侧视图。heg1△25突变体存在心包水肿（红色虚线）和静脉充血（红色箭头）。B 基于红细胞像素密度变化的三组斑马鱼胚胎的血流运动比率。

NXT改善了heg1△25突变体的心血管异常。A Tg（heg1△25；cmlc2:eGFP）接受NXT治疗后改善荧光鱼心脏异常。（V心室；心房）。B Tg（heg1△25；flk1:eGFP）接受NXT治疗后改善荧光鱼血管异常。（DA背主动脉；PCV后主静脉）。